含量試劑盒提供了一種簡單方便的方案檢測樣品中亞鐵和/或鐵離子。檢測時，載鐵蛋白在酸性緩沖液中把高價鐵溶解溶液里。然后將其還原成亞鐵離子，F(xiàn)ereneS與鐵反應(yīng)產(chǎn)生一種穩(wěn)定的化合物，593nm處有吸收峰。緩沖液中有一種特殊的螯合物消除Cu2+的干擾。試劑盒檢測線性范圍為50ul樣品中0.4-20nmol，或者鐵濃度在8uM-400uM之間的各種生物樣品。

 

　　鐵是動物和人體生長發(fā)育所必需的微量元素之一。其在機(jī)體中參與機(jī)體能量代謝、載體組成、轉(zhuǎn)運和貯存營養(yǎng)素及機(jī)體免疫機(jī)能，是機(jī)體生化反應(yīng)中多種酶的重要組分及活化因子。鐵在體內(nèi)主要以金屬絡(luò)合蛋白、亞鐵血紅素以及載氧蛋白的形式存在。無機(jī)鐵也參與到氧化還原反應(yīng)中許多酶的鐵硫簇里，比如固氮酶和氫化酶。

 

　　含量試劑盒操作步驟：

 

　　1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

 

　　2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

 

　　3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

 

　　4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

 

　　5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

 

　　6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

 

　　7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。